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檢測(cè)巨細(xì)胞病毒抗體IgM（CMVAb-IgM）

來源：北京伯樂生命科學(xué)發(fā)展有限公司上海辦事處（上海天崛電子科技有限公司） 2010年09月13日 08:45 890

檢測(cè)巨細(xì)胞病毒抗體IgM（CMVAb-IgM）

[測(cè)定方法] ELISA法

[方法學(xué)原理] 在微孔表面包被純化的巨細(xì)胞病毒抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在巨細(xì)胞病毒抗體—IgM可與微孔上抗原相結(jié)合。然后洗去未結(jié)合物質(zhì)，再加入酶聯(lián)液，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗去過量的酶聯(lián)液。zui后加入底物和色原（顯色液）。在特定時(shí)間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng)。所產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與標(biāo)本中巨細(xì)胞病毒抗體-IgM含量呈正相關(guān)。通過酶標(biāo)儀與校正和對(duì)照相比，讀出結(jié)果。

[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml，不抗凝。

[試劑]

1．微孔板

2．樣品稀釋液

3．HRP-抗人IgM酶結(jié)合物

4．陰性對(duì)照

5．陽性對(duì)照

6．洗滌劑

7．TMB顯色液

8．終止液

[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。

[測(cè)定步驟]

1．吸取10ul血清標(biāo)本加入25091標(biāo)本稀釋液中，做1：26稀釋。

2．吸取100ul稀釋過的血清、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和校正液（不稀釋），加入微孔板內(nèi)，設(shè)空白對(duì)照1孔。振蕩，混勻，去除孔內(nèi)液體中氣泡，室溫環(huán)境中孵育20min。

3．棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗5次。

4．每孔再加入100~1酶聯(lián)結(jié)合物，室溫環(huán)境中孵育20min。

5．棄去孔中酶聯(lián)液，用洗滌液洗5次。

6．每孔加人100ul TMB顯色液，室溫環(huán)境中孵育10min。

7．每孔加入100gl終止液，終止反應(yīng)，充分混勻。

8．用酶標(biāo)儀（波長為450nm）讀取吸光度。以待測(cè)樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性。

[注意事項(xiàng)]

1．整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)和生物安全守則規(guī)定，嚴(yán)防交叉污染。

2．所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

3．試劑應(yīng)保存于2～8℃冰箱，使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min。

4．洗滌時(shí)各孔均應(yīng)加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈，每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干。

5．血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存，2～8℃可保存7d，冷凍保存可至6個(gè)月，避免反復(fù)凍融。

6．試劑在儲(chǔ)存或使用過程中，禁止過熱、曝曬或強(qiáng)光。

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