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EDTA脫鈣液使用說明書

【產(chǎn)品組成】

【保存條件】

4℃，12個月

【產(chǎn)品概述】

  在組織切片過程中，一些組織內(nèi)含有a骨質(zhì)或鈣化灶時，含鈣的組織不宜直接用石蠟包埋切片。這是因為鈣和石蠟之間的密度不同，較難切出完整的切片。對含鈣組織建議固定之后，再進行脫鈣或二者同時進行。然后進行下游操作如脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。用于脫鈣的試劑很多，脫鈣劑包括有機酸、無機酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及電解法脫鈣。EDTA是一種相對較好的螯合脫鈣劑，對組織結(jié)構(gòu)影響小，可以較好的保存組織的某些酶類，經(jīng)EDTA脫鈣后的組織可以進行免疫組化和原位雜交染色。但是該法脫鈣速度太慢，一般脫需要數(shù)周至數(shù)月。

  EDTA 脫鈣液主要由EDTA、磷酸鹽等組成，pH值為7.2。其優(yōu)點是：①經(jīng)EDTA 脫鈣的組織染色結(jié)果好；②對組織的結(jié)構(gòu)損害小。其缺點是：①脫鈣速度很慢，不適合常規(guī)標本脫鈣使用；②脫鈣后組織會稍微變硬；③不宜用化學(xué)方法確定脫鈣終點。

【使用方法】

1、骨組織脫鈣時，取材不易過厚，一般大約5mm。

2、組織固定后，用PBS清洗3次，每次20min。

3、組織用蒸餾水洗清洗3次，每次20min。

4、組織轉(zhuǎn)移至20~30倍體積的EDTA 脫鈣液中，脫鈣10～30天或更長時間。如果想加快脫鈣速度，可以置于37℃進行脫鈣。如果必要，更換新的EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣，多數(shù)組織脫鈣2周～3個月即可，每周更換一次直至終點。亦可采用微波快速脫鈣法：微波爐設(shè)在200W左右的檔位，每次加熱5min，依據(jù)組織厚度和密度重復(fù)3～5min，中間間隔3～5min。

5、用蒸餾水沖洗數(shù)次。

6、常規(guī)脫水、包埋。

【注意事項】

1、厚度5mm的骨組織塊脫鈣時間一般脫鈣10~30天即可，大多數(shù)在14～60天即可。

2、適當加溫能加快脫鈣的速度，一般不應(yīng)超過37～40℃，溫度過高容易使骨組織造成松散解體，尤其不可大于60℃。

3、脫鈣應(yīng)*，防止脫鈣不足或過度。脫鈣程度應(yīng)控制在不影響組織切片的同時盡量縮短脫鈣時間，以免脫鈣過長引起組織損害。

4、脫鈣用具避免使用金屬容器，盡量使用玻璃容器。

5、骨組織脫鈣應(yīng)先固定后脫鈣或脫鈣固定同時進行，不應(yīng)先脫鈣后固定，以便減少組織的損傷程度。

6、每隔一段時間檢測一次脫鈣程度，脫鈣過度會增加組織的損傷程度，影響染色結(jié)果。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。