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《發(fā)酵茶及茶制品B族和G族黃曲霉毒素測定》征求意見

2022-01-21 08:50:11 來源：儀表網(wǎng) 閱讀量：9484

　　由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)牽頭制定的《發(fā)酵茶及茶制品B族和G族黃曲霉毒素測定》(項目計劃編號：2020-2-47)地方標準已完成征求意見稿，為進一步完善標準的相關(guān)內(nèi)容，按照《安徽省地方標準管理辦法》(皖市監(jiān)發(fā)〔2019〕10號)、《地方標準制修訂工作指南》的有關(guān)規(guī)定，現(xiàn)公開征求意見。意見反饋郵箱：zhouyu121121@hotmail.com，截止時間2022年2月10日前。

　　微生物菌群在發(fā)酵茶及含茶食品中普遍存在，正常的微生物菌群對發(fā)酵茶葉加工及品質(zhì)形成有重要作用。然而，在不良環(huán)境條件下，也容易造成有害霉菌污染，給發(fā)酵茶及含茶食品質(zhì)量安全帶來隱患。目前，全世界仍沒有針對于茶葉基質(zhì)的黃曲霉毒素標準檢測方法，不同檢測結(jié)果可比性小、爭議大。因此，制定茶葉基質(zhì)中的黃曲霉毒素檢測標準方法尤為重要。

　　本標準規(guī)定了發(fā)酵茶葉及茶制品中黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2(以下簡稱AFB1、AFB2、AFG1和AFG2)的測定方法。

　　本標準第一法為雙柱凈化-高效液相色譜柱后光化學(xué)衍生法，適用于發(fā)酵茶葉及茶制品中AFB1、AFB2、AFG1和AFG2含量的測定。

　　本標準第二法為雙柱凈化-液相色譜柱串聯(lián)質(zhì)譜法，適用于發(fā)酵茶葉及茶制品中AFB1、AFB2、AFG1和AFG2含量的測定。

　　本標準章節(jié)由：范圍、規(guī)范性引用文件、方法原理、試劑材料、儀器設(shè)備、試驗步驟、分析結(jié)果計算與表述、精密度及其他等部分組成。其中“試驗步驟”和“結(jié)果和計算”是本標準的主要技術(shù)內(nèi)容。

　　方法原理：

　　試樣中的黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2，用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液提取，提取液經(jīng)多功能凈化柱-免疫親和柱(MFC-IAC)凈化和富集，凈化液經(jīng)濃縮、定容和過濾后經(jīng)液相色譜分離，柱后光化學(xué)法衍生，經(jīng)熒光檢測器檢測。外標法定量(HPLC-fld)。

　　儀器和設(shè)備：

　　1.高速粉碎機。2.超聲波/渦旋振蕩器或搖床。3.天平：感量0.01g和0.00001g。4.渦旋混合器。5.離心機：轉(zhuǎn)速 ≥6000 r/min。6.玻璃纖維濾紙：快速、高載量、液體中顆粒保留1.6 μm。7.固相萃取裝置(配15-50 mL免疫親和層析針筒)。8.空氣壓力泵。9.氮吹儀。10.液相色譜儀：配熒光檢測器。11.液相色譜柱。12.光化學(xué)柱后衍生器(適用于黃曲霉毒素柱后衍生)。13.黃曲霉毒素多功能凈化柱或固體萃取柱(以下簡稱MFC凈化柱)。14.免疫親和柱：AFB1 柱容量 ≥200 ng，AFB1柱回收率≥80%，AFG2的交叉反應(yīng)率≥80%(驗證方法依據(jù)GB5009.22-2016)。15.針筒式濾器(100 mL規(guī)格)，可連接于空氣壓力泵。16.一次性針式過濾器：帶0.22 μm 微孔濾膜(所選用濾膜應(yīng)采用標準溶液檢驗，為有機相濾膜)。17.篩網(wǎng): 1 mm~2mm 試驗篩孔徑。

　　樣品制備：

　　液體樣品(茶水及含茶飲料)

　　采樣量需大于500mL，對于袋裝、瓶裝等密封包裝樣品，需至少采集3個獨立包裝(同一批次或號)，將所有液體樣品在一個容器中用混勻后，其中任意的100g(mL)樣品進行檢測。

　　固體樣品(紅茶、黑茶、含茶食品)

　　采樣量需大于1.0kg，用高速粉碎機將其粉碎，過篩，使其粒徑小于2mm，混合均勻后，以四分法縮分至100g，儲存于樣品瓶中，密封保存，供檢測用。

　　樣品提?。?br />

　　液體樣品(茶飲料)

　　取50 mL茶湯(精確至0.01 mL)，然后加入50mL乙腈(精確至0.01mL)、7.5g氯化鈉(精確至0.01g)，渦旋1 min，5000 r/min離心10 min，取上清，再加入50 mL乙腈重復(fù)提取，然后合并兩次上清，并加入2 g 氯化鈉(精確至0.01g)，2 g硫酸鎂(精確至0.01g)，5 g PVPP(精確至0.01g)，2gPSA(精確至0.01g)，5000 r/min離心10 min，取上清液備用。

　　固體樣品(紅茶、黑茶、含茶食品)

　　稱取5g試樣(精確至0.01g)于50mL離心管中，加入25mL乙腈-水溶液(84+16)或甲醇-水溶液(70+30)，渦旋混勻，置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20 min，將提取液全部轉(zhuǎn)移至針筒式濾器，真空抽濾全部提取液于離心管中，在6000 r/min下離心10 min(或玻璃纖維濾紙過濾)，取上清液備用。

　　定性檢測：

　　試樣中目標化合物色譜峰的保留時間與相應(yīng)標準品色譜峰的保留時間相比較，變化范圍應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。

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