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技術(shù)文章
人流感病毒B（FLU B）ELISA試劑盒使用說明書
點擊次數(shù)：578 發(fā)布時間：2011-5-16
人流感病毒B（FLU B）ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：人流感病毒B（FLU B）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒定性測定人血液、或其它相關(guān)組織中流感病毒B（FLU B）
實驗原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標本中人流感病毒B（FLU B）。用純化的流感病毒B（FLU B）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中流感病毒B（FLU B）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的流感病毒B（FLU B）抗體結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人流感病毒B（FLU B）的存在與否。
試劑盒組成：
| 1 | 20倍濃縮洗滌液 | 30ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶標試劑 | 6ml×1/瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求：
1．標本處理：血清、血漿標本可直接檢測
2．標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測，可將標本在-20℃保存一個月，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為人流感病毒B（FLU B）陰性
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人流感病毒B（FLU B）陽性
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月